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PCR(Polymerase Chain Reaction)技術(shù),中文譯為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),是一種在體外(試管、切片…)擴(kuò)增核酸的技術(shù)。PCR的基本反應(yīng)包括以DNA為模板的反應(yīng)和以mRNA為模板的反應(yīng)。
PCR技術(shù)是模擬體內(nèi)天然DNA(脫氧核糖核酸)的復(fù)制過程。以擴(kuò)增DNA為例,其基本原理是在模板、引物、4種dNTP和耐熱DNA聚合酶存在的條件下,特異擴(kuò)增位于兩段已知序列之間的DNA區(qū)段的酶促合成反應(yīng)。
PCR儀(基因擴(kuò)增儀)一般有四種類型,分別是普通基礎(chǔ)PCR儀,梯度PCR儀,實(shí)時熒光定量PCR儀和原位PCR儀。這四種PCR儀的一般原理有相似的地方,但在結(jié)構(gòu)和配件方面還存在一些差異。
(1)普通基礎(chǔ)PCR儀由主機(jī),加熱模塊,PCR管樣品基座,熱蓋,控制軟件組成。
(2)梯度PCR儀除具有普通PCR儀的結(jié)構(gòu)外,還具有特殊的梯度模塊,可實(shí)現(xiàn)對梯度溫度和梯度時間等參數(shù)的調(diào)整。因此可以在一次實(shí)驗(yàn)中對不同樣品設(shè)置不同的退火溫度和退火時間,從而可在短時間內(nèi)對PCR實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化,提高PCR科研效率。
(3)實(shí)時熒光定量PCR儀在普通PCR儀的基礎(chǔ)上增加一個熒光信號采集系統(tǒng)和計算機(jī)分析處理系統(tǒng)。熒光檢測系統(tǒng)主要包括激發(fā)光源和檢測器。激發(fā)光源有鹵鎢燈光源、氬離子激光器、發(fā)光二極管LED光源,前者可配多色濾光鏡實(shí)現(xiàn)不同激發(fā)波長,而單色發(fā)光二極管LED價格低、能耗少、壽命長,不過因?yàn)槭菃紊枰煌腖ED才能更好地實(shí)現(xiàn)不同激發(fā)波長。監(jiān)測系統(tǒng)有超低溫CCD成像系統(tǒng)和PMT光電倍增管,前者可以一次對多點(diǎn)成像,后者靈敏度高但一次只能掃描一個樣品,需要通過逐個掃描實(shí)現(xiàn)多樣品檢測,對于大量樣品來說需要較長的時間。
(4)原位PCR儀與普通PCR儀相比,用玻片代替了PCR管,其反應(yīng)過程是在載玻片的平面上進(jìn)行的。
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